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<title>Random Priming</title>

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<h1 id="firstHeading" class="firstHeading mw-first-heading"><span class="mw-page-title-main">Random Priming</span></h1>

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<div id="mw-content-text" class="mw-body-content mw-content-ltr" lang="de" dir="ltr"><div class="mw-content-ltr mw-parser-output" lang="de" dir="ltr"><p>Als <b>Random priming</b> (oder auch <b>random-primed oligo-labeling</b>) wird in der <a href="Molekularbiologie" title="Molekularbiologie">Molekularbiologie</a> eine Technik zur <a href="Molek%C3%BClmarkierung" title="Molekülmarkierung">Markierung</a> von <a href="Desoxyribonukleins%C3%A4ure" title="Desoxyribonukleinsäure">DNA</a> bezeichnet. Dabei synthetisiert man an <a href="Denaturierung_(Biochemie)" title="Denaturierung (Biochemie)">denaturierte</a> (einzelsträngige) DNA mit Hilfe von kurzen <a href="Primer" title="Primer">Primern</a> als Startpunkt einen markierten Gegenstrang.

</p><p>Die Methode beruht auf den Arbeiten von Andrew P. Feinberg und <a href="Bert_Vogelstein" title="Bert Vogelstein">Bert Vogelstein</a> von der <a href="Johns_Hopkins_University" title="Johns Hopkins University">Johns Hopkins University</a>. Mit über 21.000 im <a href="Web_of_Science" title="Web of Science">Web of Science</a> annotierten Zitierungen gehört sie zu den meistzitierten Arbeiten in der Molekularbiologie.

</p><p>Zu Beginn wird die zu markierende DNA nach Zugabe eines Gemisches aus <a href="Oligonukleotid" class="mw-redirect" title="Oligonukleotid">Oligonukleotiden</a>, meist Hexaoligonukleotide mit zufälliger Sequenz, bei 95 °C denaturiert. Während des Abkühlens auf Raumtemperatur lagern sich passende Oligonukleotide an komplementäre Sequenzabschnitte der DNA an (<i>annealing</i>). Das als <a href="Klenow-Fragment" title="Klenow-Fragment">Klenow-Fragment</a> bezeichnete Fragment der <a href="DNA-Polymerase" class="mw-redirect" title="DNA-Polymerase">DNA-Polymerase I</a> aus <a href="Escherichia_coli" title="Escherichia coli"><i>E. coli</i></a> nutzt diese Primer, um den Gegenstrang bei 37 °C mit Hilfe markierter Nukleotide zu synthetisieren. Man benutzt das Klenow-Fragment, da dieses zwar von 5' nach 3' synthetisieren (<a href="Polymerase" class="mw-redirect" title="Polymerase">Polymerase</a>-Aktivität) und von 3' nach 5' Nukleotide herausschneiden kann (<a href="Exonuklease" title="Exonuklease">Exonuklease</a>-Aktivität), jedoch nicht von 5' nach 3' schneidet. Das Klenow-Fragment fällt durchschnittlich nach 500 bis 2000 Basen von der Vorlage ab.

</p><p>Die Markierung der DNA erfolgt wie bei der <a href="Nick_translation" class="mw-redirect" title="Nick translation">Nick translation</a> dadurch, dass <a href="Radioaktivit%C3%A4t" title="Radioaktivität">radioaktiv</a> markierte (z. B. [α-<sup>32</sup>P]<a href="Desoxyadenosintriphosphat" title="Desoxyadenosintriphosphat">dATP</a>) oder mit einem Markierungs-Molekül (<a href="Digoxygenin" class="mw-redirect" title="Digoxygenin">Digoxygenin</a>, <a href="Biotin" title="Biotin">Biotin</a>, <a href="Fluoreszenzfarbstoff" class="mw-redirect" title="Fluoreszenzfarbstoff">Fluoreszenzfarbstoff</a>) verknüpfte <a href="Nukleotide" title="Nukleotide">Nukleotide</a> eingesetzt werden. Durch die nur kurzen zu synthetisierenden Stränge ist dieses System sehr einfach und schnell. Vor der Anwendung werden die DNA-Moleküle, z. B. durch Größenausschluss-Chromatographie, von den nicht eingebauten Nukleotiden abgetrennt.

</p>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Literatur">Literatur</h2></div>

<ul><li>A. P. Feinberg & <a href="Bert_Vogelstein" title="Bert Vogelstein">B. Vogelstein</a> (1983): <i>A technique for radiolabeling DNA restriction endonuclease fragments to high specific activity.</i> In: <i><a href="Anal._Biochem." class="mw-redirect" title="Anal. Biochem.">Anal. Biochem.</a></i> Bd. 132, S. 6–13. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/6312838?dopt=Abstract">PMID 6312838</a></li></ul>

<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Siehe_auch">Siehe auch</h2></div>

<ul><li><a href="Nick_translation" class="mw-redirect" title="Nick translation">Nick translation</a></li></ul></div><div><div class="zim-footer">

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